货品编号： 索莱宝.CA1080-100T 品 牌：索莱宝 品 名：支原体检测试剂盒 规 格： 100T 产品描述： 本试剂盒是利用荧光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）检测支原体污染。这种染料会结合到DNA的A-T富集区域，

因为支原体的DNA中A-T含量高（55％～80％），所以可将其染色而被检测到。被支原体污染的细胞经染色后在细胞

周围可看到许多大小均一的荧光小点，即为支原体的DNA染色斑，说明有支原体污染。Hoechst 33258的最大激发波

长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为

461nm。

操作步骤： 贴壁细胞： 1.被检细胞接种于无菌的6孔细胞培养板中，接种密度为1-2×104。同时，接种正常无支原体感染的同种细胞，作为阴

性对照。 2.5天后，先吸去培养液，再加入1ml的固定液，静置20min， 3.吸去固定液，晾干。 4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞），37℃避光放置15-20min

或室温静置20～30min。 5.吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml灭菌超纯水洗涤三次，直接风干。风干后加入一滴封片液，并以盖玻片覆盖。 6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。

悬浮细胞： 1.收集需检测的细胞，1500rpm，5min。 2.将收集的细胞涂片于载玻片上，再加1ml的固定液，静置20min。 3.吸去固定液，晾干。 4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液（Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞），37℃避光放置15～20min

或室温静置20～30min。 5.吸去Hoechst 33258工作液，用无菌水洗涤玻片3次，直接风干。风干后加入一滴封固液，并以盖玻片覆盖。 6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。

结果判断（参考）： 阴性：仅见细胞的细胞核呈现黄绿色荧光。 阳性：除细胞外，细胞周围可见大量的大小均一的荧光着色颗粒。

注意事项： 1.Hoechst工作液对人体有害，请注意防护。 2.固定液有刺激性气味，建议在通风橱进行固定。 3.支原体检测时，最好用不含抗生素的培养液培养2～3代，这样容易避免假阴性结果。 4.本试剂盒用于6孔板检测时，可以进行50次检测反应。 5.检测支原体污染，可以使用支原体高效Vero细胞，这样可以提高检测灵敏度，即将被检测样品接种于Vero细胞进行检测。

注意： 1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。 2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。