货品编号: TOYOBO.KFX-101
品牌: TOYOBO
品名: KOD FX
规格: 200U×1支
用途
PCR
说明
KOD FX是在KOD DNA polymerase基础上开发的高性能PCR试剂。本酶具有出色的「扩增成功率」、「延伸性」和「扩增效率」,可对各种长度的目的片段进行PCR。KOD FX是PCR成功率非常高,适合于各种实验条件的PCR酶。实际测序结果表明,KOD FX在PCR过程中,产生碱基错配的频率(错配率)144535个碱基中仅为19个(保真性是Taq DNA polymerase的约11倍)。由此可见,KOD FX的保真性虽比KOD -Plus-、KOD -Plus-Ver.2和KOD -Plus- Neo要差一些,但仍可进行充分的克隆。通过本酶扩增的DNA片段的末端基本上都被平滑化。 | |
特征
●高扩增成功率对高GC含量的目的片段、细胞悬浊液、小鼠尾巴/植物裂解液、全血、霉菌、酵母等粗样品也可进行高成功率扩增。
●超群的扩增效率由于得率很高,因此即便模板量很少也可进行扩增。
●出色的延伸性已确认:以λDNA为模板可以扩增出40kb;以人类基因组DNA为模板可扩增出24kb;以cDNA为模板可扩增出13.5kb。
●通过热启动提高了PCR的反应效率通过将2种抗KOD单克隆抗体预混合在酶中,抑制了PCR反应前常温状态下的多聚酶活性和3'→5' Exonuclease活性。抗体在PCR最初的变性步骤即发生失活,但对扩增反应没有任何影响。
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实验例
1. 碱裂解法制备的鼠尾裂解液的扩增例
向直接PCR反应液中添加碱裂解法(请参照右边的基本反应条件)制备的鼠尾裂解液0.5μl,以Mouse membrane glycoprotein(Thy-1)gene(M10246)为目的基因,用2步法循环,作30个循环的扩增。
结果显示,只有使用KOD FX时,才可以确认到明确的扩增。碱裂解法,相比使用Proteinase K的方法,操作简单,可以更加简便地分析转基因鼠的基因。
另外,扩增产物无须纯化,以下是用几种限制性内切酶消化处理的结果,可以确认扩增产物可被内切酶完全消化切断。
2. 一步法制备的植物裂解液的扩增例
向直接PCR反应液中添加一步法(请参照右边的基本反应条件)制备的番茄、烟叶、稻叶及精米裂解液1μl,以rbcL为目的基因,用2步法循环,作30个循环的扩增。
结果显示,只有使用KOD FX时,才可以确认到明确的扩增。通过将一步法与KOD FX组合,就可以简便地对植物基因进行分析。
3. 模板DNA量的探讨
使用KOD FX与其他公司的PCR酶,比较了模板DNA的量与扩增效率。
扩增反应中,以0.1ng~100ng的基因组DNA为模板,以human β-globin 2.8kb为目的基因,50μl反应体系,引物15pmoles,KOD FX使用了1U,按2步法,作了30个循环的扩增。
结果显示,相比其他公司的PCR酶,KOD FX可以得到更高的扩增效率。
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