产品英文名称：CB031-0081 / Human MSC medium, chemically-defined

产品中文名称：间充质干细胞无血清培养基CB031-0081

间充质干细胞无血清培养基是 为扩增从骨髓、脐带血或脂肪组织提取的人类间充质干细胞（human mesenchymalstem cells, hMSC)而设计的无血清培养基。该培养基化学成分明确，所有组分为化学合成或重组纯化的蛋白，并且无异源蛋白，不含直接从任何动物组织提取成份。因此它 不存在批间误差和潜在的动物源性病原体。如果配合使用特定的培养板（见下)，还可以省去铺板的工序和时间，免去铺板胶的费用。

Excell CB031-0081 / Human MSC medium, chemically-defined 的产品信息

基础培养基 450ml 2-8℃避光 可以保存6个月

添加物 50ml -80℃避光，避免反复冻融可以保存 6个月

Excell CB031-0081 / Human MSC medium, chemically-defined 的使用方法

一 培养基配制：

1. 过夜2‐8°C解冻添加物。

2. 无菌条件下配制100ml间充质干细胞无血清完全培养基。

3.如果需要也可加入抗菌素（自选)。

配制好的间充质干细胞无血清完全培养液（包含基础培养基、添加物、谷氨酸盐）2-8°C 避光保存，保存期1 个月。

二 培养基的使用：

培养于其它无血清或有血清培养基的MSCs 可以快捷方便地转换到本品中培养。多数情况下，生长状态良好的MSCs直接换液为本品即可。个别情况下，可能需要逐步转换，如按20%，40%，60%，80%，100%依次递增，至最终完全使用本品。

三 hMSCs细胞的复苏：

1.37°C水浴快速复苏冻融细胞。

2.将细胞转移到无菌50ml离心管中。

3.逐滴向装有1ml细胞液的离心管中加入10ml预先复温的间充质干细胞无血清完全培养基，注意边加边轻轻晃动离心管。

4.将上述混合溶液转移到细胞培养瓶或细胞培养板中。

5.在5%CO2，37°C培养箱中静置培养。

6.培养24h，换液。

7.此后每隔2天换液，直到传代培养。

四 传代培养：

如果使用特定的细胞培养板，如BD PrimariaTM 系列产品或Corning CellBINDTM 系列产品，那么使用本产品培养间充质干细胞是不需要预先铺板。传统的细胞培养瓶和培养板是否无需铺板正在评估中。对于那些还没有被评估的产品或不适用于不 预先铺板工序的产品，推荐使用人纤维连接蛋白（Fibronectin)进行铺板。

1.在镜下观察（使用本产品或其它培养基)细胞，确定传代的时间，推荐在细胞量达到70%满的时候传代，不要让细胞超过80%满！

2.预先将0.05%胰酶/0.53mM EDTA和间充质干细胞无血清完全培养基复温到37°C待用。

3.用移液枪吸走旧培养基。

4.用DPBS洗一遍（自选)。

5.加入0.05%胰酶/0.53mM EDTA液以覆盖住细胞表面，推荐室温消化细胞（消化液用量：6孔板每孔约10cm2加入0.5ml，25cm2培养板加入1ml)。

6. 镜下观察细胞，当看见细胞开始从培养板底脱离，轻轻敲击培养板边缘帮助细胞脱落。消化时间为1‐3分钟。

7. 加入2倍于消化液体积的间充质干细胞无血清完全培养基，将细胞悬液收集于15ml离心管中。

8.1200rpm离心10分钟。

9.尽量弃去离心后的上层清液。用间充质干细胞无血清完全培养基重悬细胞。此时可取细胞悬液进行细胞计数。

10.按照3-5X103/cm2密度接种细胞。

11.5%CO2，37°C培养箱中培养。

12.每隔2天换新鲜的间充质干细胞无血清完全培养基。

13.当细胞生长达到70%满时，传代（一般每隔3-4天)。

五 冻存细胞：

1.配制细胞冻存液。

2.离心分离细胞，用冻存液重悬细胞。

3.将冻存管转移到冻存盒中，置于-80°C冰箱过夜。

4.将细胞转移到液氮罐中长期贮存。

Excell 间充质干细胞无血清培养基CB031-0081 产品英文描述

Serum free medium for amplification of extracted from bone marrow, umbilical cord blood and adipose tissue of human mesenchymal stem cells, mesenchymal stem cells (human mesenchymalstem cells, hMSC) of serum free medium and design. The culture medium composition clearly, all components for chemical synthesis and purification of recombinant protein, and no heterologous protein, containing no ingredients directly from any animal tissue. Therefore, it does not exist between errors and the potential of animal pathogens. If used in conjunction with the culture plate specific (see below), but also can save time and planking, relieve the cost of glue.