产品英文名称：Peroxidase Labeling Kit-NH2

产品中文名称：辣根过氧化物酶标记试剂盒- NH2

Peroxidase Labeling Kit-NH2 产品特性

整个标记过程仅需3个小时

整个标记过程在1支过滤管中进行

酶标抗体回收率高

Peroxidase Labeling Kit-NH2 产品描述

该试剂盒主要用于制备酶免疫分析 (EIA) 所需的辣根过氧化物酶标IgG以及竞争性EIA所需的辣根过氧化物酶标抗原。该试剂盒中的NH2-reactive peroxidase具有琥珀酰亚胺基 (NHS)，它能够与含有NH2的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的所有试剂，包括储存用缓冲液。标记过程相当简单：只需将IgG和NH2-reactive peroxidase混合并且在37℃下培养2小时。NH2-reactive peroxidase不需任何活化就可以和靶分子形成共价键。NHS与辣根过氧化物酶之间的距离大约为1.2 nm，为辣根过氧化物酶分子半径的一半。因此，当辣根过氧化物酶标IgG用于EIA时，NH2-reactive peroxidase的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程，也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候，使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。由于NH2-reactive peroxidase自身的氨基已经被阻断，因此自身不会发生反应。

Peroxidase Labeling Kit-NH2 试剂盒内容

- NH2-Reactive Peroxidase ..... 100 g x 3 tubes -

- Reaction Buffer .................... 200 l x 1 tube -

- Filtration Tube ..................... 3 tubes

- Washing Buffer ................ 4 ml x 1 bottle

- Storage Buffer ................. 4 ml x 1 bottle

标记IgG操作步骤

（1）将100 μl WS buffer以及含有100 μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）

（2）8,000-10,000 g离心10分钟。b）

（3）将10 μl DMSO加入到NH2-reactive biotin中并用移液器吹打使其溶解。c）

（4）将100 μl Reaction buffer以及8 μl NH2-reactive biotin溶液加入到过滤管中，吹打使其混合。d）

（5）将过滤管放入培养箱中，37℃培养10分钟。

（6）将100 μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000 g离心10分钟，b）除去滤液。

（7）将200 μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000 g离心10分钟，b）重复该步骤一次。

（8）将200 μl WS buffer加入到过滤管中吹打10-15次来回收标记产物。e）将该溶液转移到0.5 ml试管中，在0-5℃下保存。

a）样品溶液的体积不应超过100 μl。如果抗体浓度低于1 mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100 μg。如果聚积过程中滤液的体积超过400 μl，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）NH2-reactive biotin在管子的底部，向管底加入10 μl DMSO，吹打数次使其溶解。

d）如果IgG的量为200 μg，在步骤4时加入所有的NH2-reactive biotin溶液。

e）并不一定要使用WS buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。

Peroxidase Labeling Kit-NH2 注意事项

所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。

所需标记的较小的氨基化合物的分子量要<5,000。

标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。

如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质，如BSA或凝胶，在使用该试剂盒标记前请先纯化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化（不包含于此试剂盒中）。如果IgG溶液中含有小的不溶物，离心后提取上清液来标记。

如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的酶NH2-reactive peroxidase放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持酶的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持标记试剂的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。