英文名称：KAPA HiFi HotStart ReadyMixPCR Kit

中文名称：KAPA HiFi高保真热启动DNA聚合酶预混液

KAPA HiFi HotStart ReadyMix是一种DNA扩增预混液，包含引物和模板之外扩增完全反应必需成分。适用PCR、NGS高通量测序文库等的扩增。预混液所含KAPA HiFi DNA Polymerase是新型改造B族DNA聚合酶，错误率比野生型Taq DNA聚合酶低约100倍，成功率和产率比野生型B族proofreading活性的DNA聚合酶更高。

HiFi 热启动高保真DNA聚合酶应用

用于常规测序的PCR（直接测序或克隆PCR产物的测序）

新一代测序文库扩增（与KAPA文库扩增方案配合使用时）

扩增DNA片段用于克隆和蛋白质表达或基因组表征

定点突变

KAPA HiFi DNA聚合酶扩增特点

高DNA亲和力，无需辅助蛋白和DNA结合结构域

高持续合成能力

长片段扩增能力

选择失活，低非特异性扩增

KAPA HiFi HotStart DNA聚合酶是一种新型B家族DNA聚合酶，经过工程改造后对DNA的亲和力增加，不需要辅助蛋白或DNA结合域。与野生型B家族DNA聚合酶相比，该酶固有的高持续合成能力可显著提高合成产量，速度和灵敏度。此外，扩增长片段以及富含GC和AT片段的能力显著提高。该酶与特有抗体结合，第一次变性步骤之前可以保持失活状态。这可以防止反应过程中的非特异性扩增，提高灵敏度，并提高反应效率。

组份（除引物和模板的扩增反应液）

DNA聚合酶+缓冲液混合

— DNA聚合酶：0.5U /25μL反应

— 缓冲液：dNTPs（每种dNTP 0.3mM，1X），MgCl₂（2.5mM，1X ）和稳定剂

KAPA HiFi高保真DNA聚合酶技术参数

聚合酶种类：改造B族DNA聚合酶

聚合酶活性：KAPA HiFi HotStart DNA聚合酶具有5’g3′聚合酶和3’g5′核酸外切酶（proofreading）活性，但没有5’g3′核酸外切酶活性。

扩增片段长度：可从基因组DNA中扩增高达15kb的目标或从较不复杂的目标扩增20kb。

KAPA HiFi高保真DNA聚合酶预混液设计用于各种目标和大小片段的常规高保真PCR。它的错误率比野生型Taq DNA聚合酶低约100倍，成功率和产率比野生型B家族（proofreading）DNA聚合酶更高。另外，KAPA HiFi HotStart比野生型B家族DNA聚合酶需要更短的反应时间。 KAPA HiFi HotStart DNA聚合酶具有5’g3′聚合酶和3’g5′核酸外切酶（proofreading）活性，但没有5’g3′核酸外切酶活性。