电泳缓冲液 概述 电泳缓冲液是指在进行分子电泳时所使用的缓冲溶液，用以稳定体系酸碱度。常见的核酸电泳缓冲液有：TAE、TBE、TPE和MOPS等。 作用 缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负极都会发生电解反应，正极发生的是氧化反应（4OH–4e->2H2O+O2)，负极发生的是还原反应（4H++4e->2H2)，长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力，使溶液两极的pH保持基本不变。 电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分子的迁移，例如，一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子，Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢；太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。 电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，加入浓度为1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等离子，防止电泳时激活 DNA酶，此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。 特点 TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。 TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用，并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的回收率降低，所以不宜在回收电泳中使用。 TPE的缓冲能力也较强，但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出，所以也不宜在回收DNA片段的电泳中使用。 配制方法 50×TAE Buffer 配制方法： 1。称量氨基丁三醇 242g，Na2EDTA.2H2O 37.2g 于1L烧杯中； 2。向烧杯中加入约800ml去离子水，充分搅拌均匀； 3。加入57.1ml的冰乙酸，充分溶解； 4。用NaOH调pH至8.3，加去离子水定容至1L后，室温保存。 使用时稀释50倍 即1×TAE Buffer 10×TBE Buffer配制方法： 1。称量氨基丁三醇 108g，Na2EDTA.2H2O 7.44g，硼酸55g 于1L烧杯中； 2。加入约800ml去离子水，搅拌均匀； 3。用NaOH调pH至8.3，加去离子水定容至1L后，室温保存。 使用时稀释10倍 即1×TBE Buffer 10×TBE缓冲液 保存于运输说明： RT 详细信息： 10×TBE缓冲液 10×TBE缓冲液 货号 规格 价格 M9031 500 ml 180 应用 核酸分子琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶电泳。 同时作为电泳缓冲液和凝胶制备缓冲液。 用于小于1500 bp RNA和DNA电泳分离。 不宜在回收电泳中使用。 注意事项 凝胶制备和电泳使用新鲜0.5×TBE缓冲液。 0.5×TBE缓冲液配制：50 ml 50×TBE与950 ml去离子水充分混匀。 双链线性核酸分子在TBE缓冲液中的迁移速度要比TAE中慢10%。 注：电泳缓冲液一般以储存液形式配制，浓度为n10×，工作时稀释n10倍，浓度为1×，而TBE储存液存放时间过长容易出现沉淀，影响电泳结果，因此配制成10×，工作浓度为 0.5×。为保持电泳所需的离子强度和pH，应经常更换电泳缓冲液。