KOD -Plus-系列酶（TOYOBO）KOD-201

特征2.　通过热启动提高了PCR反应效率通过将2种抗KOD单克隆抗体预混在酶中，抑制了PCR反应前常温状态下的多聚酶活性和3'→5'核酸外切酶活性（该活性是产生非特异性反应的主要原因）。抗体在PCR的zui初变性步骤即发生失活，对扩增反应没有任何影响。特征3.　延伸性?扩增效率的提高对反应Buffer的组成进行了zui优化的重组，使之较以往的KOD DNA polymerase延伸性?扩增效率均有很大的提高。

特征4.　超群的耐热性因其耐热性比Taq DNA Polymerase更为优良，故可以将热变性步骤的温度设定值提高，对GC-rich等容易形成高级结构的目的片段尤其适用。

特征5.　高PCR成功率【KOD -Plus- Ver.2】对难扩增的目的片段、长目的片段的PCR成功率比KOD -plus-更高。另外，也降低了带入的逆转录反应液对PCR反应的抑制。

＜几点建议＞

●PCR产物的克隆

由于本酶的PCR产物已被平滑化，可用平滑末端克隆法进行克隆。此时，如已对载体进行了脱磷酸化处理，就需要对PCR产物进行磷酸化，或使用带5'磷酸基的引物。　另外，由于本酶的PCR产物已被平滑化，不能直接进行TA克隆。可使用按以下方法开发的TA克隆专用试剂盒「TArget Clone -Plus-」。

●PCR条件的设定

酶的标准使用量为50μl反应体系1U。延伸反应在68℃条件下进行，按1kb目的片段1min.的标准。出现拖尾条带时，可降低MgSO₄浓度，无法确认到扩增时，可提高MgSO₄浓度。

●GC-rich模板的情况

在反应液中添加终浓度为2?5%的DMSO可得到改善。

●以RT反应液为模板的情况

过量带入RT反应液有可能会对PCR反应产生抑制作用。建议带入到PCR的RT反应液在PCR反应液的1/25以下（zui好在1/50以下）。这样就无需考虑RT反应液中Mg²⁺、dNTPs的影响，只要按照基本反应条件添加本酶中添付的dNTPs和MgSO₄即可。

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