货品编号： 博士德.SA1052 品牌： 博士德 品名： 即用型SABC-AP(兔IgG)试剂盒 规格： 1/2Kit 保存条件： 4℃可保存一年，应避免冷冻。

试剂盒内容

1. 5%BSA封闭液：12ml。用于组织切片的封闭。 2. 二抗：生物素标记山羊抗兔12ml。 3. SABC-AP。12ml，碱性磷酸酶标记链酶亲和素。 4. BCIP/NBT显色剂(×20)：1ml。 5. 水溶性封片剂：12ml。 6. 中性核固红，12ml。

工作原理 SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，

分子量47000。同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），

经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，IP=6.0~6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素

的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—BiotinComplex。根据研究，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十

个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC 具有很高的敏感性。SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。

使用说明 用户自备试剂： 1．粘片剂APES 或POLY-L-LYSINE（博士德公司有售）。 2．免疫组化专用PBS（pH7.2-7.6）配法：1000ml 蒸馏水中加氯化钠8.5g, Na2HPO4 2.8g,NaH2PO4 0.4g。如果用的是含水磷酸

盐，应加上分子式中水的含量。 3．0.01M 枸橼酸盐缓冲液：1000ml 蒸馏水中加枸橼酸三钠（C6H5Na3O72H2O）3g, 枸橼酸(C6H8O7H2O ) 0.4g。 免疫组化染色程序的选择：用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比较各程序染色结果。 A 程序：石蜡切片热修复抗原程序。促进某些位于蛋白质内部的位点暴露。 B 程序：石蜡切片酶消化程序。促进某些被固定遮避的抗原位点暴露。 C 程序：石蜡切片不消化/不修复程序。适于稳定的抗原。 D 程序：细胞涂片，冰冻切片染色程序。 A.石蜡切片热修复抗原染色程序: 1. 载玻片防脱片剂处理:可选择APES 或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60 ℃30-60 分以使切片紧密粘附。 2. 切片常规脱蜡至水。 3. 30%H2O2 1 份+蒸馏水10 份混合,室温5-10 分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3 次。 4. 热修复抗原:将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10 分钟后，反复1-2 次。冷却

后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2 次。 5. 滴加5%BSA 封闭液,室温20 分钟。甩去多余液体, 不洗。 6. 滴加适当稀释的一抗（兔IgG），20-37 ℃ 1~2 小时左右。也可4℃过夜。0.01M TBS（pH9.0-9.5）洗2 分钟×3 次。（一抗的稀释

度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，

可降低一抗浓度和缩短孵育时间。） 7. 滴加生物素化山羊抗兔IgG,20-37℃ 20 分钟。0.01M TBS（pH9.0-9.5）洗2分钟×3 次。 8. 滴加试剂SABC-AP,20-37℃ 20 分钟。0.01M TBS（pH9.0-9.5）洗5 分钟×4 次。 9. 显色:BCIP/NBT用0.01M TBS（pH9.0-9.5）按1：20的比例稀释，混匀后加至切片。20-37℃显色10-30分钟，镜下控制反应时间。

蒸馏水洗涤。 10. 核固红轻度复染。水洗，干燥后水溶性封片剂封片（水溶性封片剂应加温至60℃左右）。显微镜观察。 B. 石蜡切片酶消化程序: 以下面的步骤代替A 程序中的第4 步:滴加复合消化液(博士德有售)5-10 分钟。蒸馏水洗3 次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。 C. 石蜡切片不消化/不修复程序: 对于不需要微波修复或消化的抗原,省略A 程序中的第4 步即可。 D.血涂片，细胞和冰冻切片染色程序 1.载玻片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine）。抗凝血经分层离心后涂片；培养细胞也可涂片或贴片生长；冰冻切片室温风扇吹干。 2.固定方案首选4%多聚甲醛或10%福尔马林固定30 分钟。 3. 30%H2O2 1 份+纯甲醇50 份混合,室温浸泡30 分钟，以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水洗1-2 次。其余步骤和石蜡切片5-10 步相同。

如果冰冻切片直接染色结果不理想时,可以参照石蜡切片对切片进行热修复，方法和石蜡切片4-10 步相同。

注意事项： 1. 如果染色背景过高，在SABC 反应之后，BCIP/NBT显色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN20 的PBS洗涤切片4 次，单纯PBS洗2次，

然后DAB 显色。

2. 热修复抗原可选0.01M 枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）；也可以使用PBS、TBS 等多种缓冲液。