直链淀粉/支链淀粉[胶淀粉]检测试剂盒

名称:直链淀粉/支链淀粉（胶淀粉）检测试剂盒 产品货号：K-AMYL 产品品名：直链/支链淀粉检测试剂盒 英文品名：Amylose/Amylopectin assay Kit 规格型号：100 assays per kit 规格: 100次 产地:爱尔兰 用途:用于测量谷物和面粉中直链淀粉/支链淀粉的比例和淀粉含量。 标配:四玻璃瓶加两个塑料瓶 在水中的溶解度:易溶 pH值:中性 气味:无 状态:粉末和液体 保持期:10年以上（冰箱内）

谷类淀粉的许多特性决定其最终用途，这些取决于直链淀粉/支链淀粉的比率。这些特性包括糊化和凝胶化，溶解度，抗性淀粉的形成以及整颗大米的烹饪和构造特性。因此，淀粉中直链淀粉含量的测定是淀粉加工的一个重要的质量参数。

最常用的测定谷物淀粉中直链淀粉含量的方法是利用电势，电流测定或直链淀粉的碘结合能力比色测定直链淀粉-碘色合配合物。然而，这些方法具有不确定性。支链淀粉-碘复合物也可以形成，这样降低了利用非比色法测定的游离碘离子的浓度，并且用比色法测量时，该复合物可能和直链淀粉-碘复合物吸收相同波长的光。这种复合物致使直链淀粉的测定含量超过实际含量，需要进行校正。Gibson等详细列举了使用这些方法所遇到的许多其他问题。 支链淀粉结合ConA的特殊复合物为淀粉中直链淀粉的测定提供了一种替代方法，而且不存在不确定性问题。在指定pH值，温度和离子强度的条件下，ConA特异性结合分支多糖并形成沉淀，这种结合以多个非还原性末端基团上的α-D-吡喃葡萄糖基或α-D-吡喃甘露糖基单位为基础。因此，ConA可以有效结合淀粉中的支链淀粉成分，但是不能结合线性为主的直链淀粉成分。

前言:

谷类淀粉的许多特性决定其最终用途，这些取决于直链淀粉/支链淀粉的比率。这些特性包括糊化和凝胶化，溶解度，抗性淀粉的形成以及整颗大米的烹饪和构造特性。因此，淀粉中直链淀粉含量的测定是淀粉加工的一个重要的质量参数。

最常用的测定谷物淀粉中直链淀粉含量的方法是利用电势，电流测定或直链淀粉的碘结合能力比色测定直链淀粉-碘色合配合物。然而，这些方法具有不确定性。支链淀粉-碘复合物也可以形成，这样降低了利用非比色法测定的游离碘离子的浓度，并且用比色法测量时，该复合物可能和直链淀粉-碘复合物吸收相同波长的光。这种复合物致使直链淀粉的测定含量超过实际含量，需要进行校正。Gibson等详细列举了使用这些方法所遇到的许多其他问题。

支链淀粉结合ConA的特殊复合物为淀粉中直链淀粉的测定提供了一种替代方法，而且不存在不确定性问题。在指定pH值，温度和离子强度的条件下，ConA特异性结合分支多糖并形成沉淀，这种结合以多个非还原性末端基团上的α-D-吡喃葡萄糖基或α-D-吡喃甘露糖基单位为基础。因此，ConA可以有效结合淀粉中的支链淀粉成分，但是不能结合线性为主的直链淀粉成分。

此方法是Yun和Matheson改进的ConA方法。分析之前用乙醇预处理去除脂质。

直链淀粉/支链淀粉[胶淀粉]检测试剂盒 原理：

淀粉样品通过加热完全地溶解在二甲基亚砜（DMSO）里。用乙醇沉淀淀粉去除其中的脂质，回收沉淀的淀粉。用醋酸/盐溶液溶解沉淀的样品，加入ConA，特异性沉淀支链淀粉，离心去除沉淀。单位体积上清液中的直链淀粉用酶水解为D-葡萄糖，然后用葡萄糖氧化酶/过氧化物酶试剂进行测定。另外一份单位体积醋酸/盐溶液中的总淀粉同样用酶水解为D-葡萄糖，然后加入葡萄糖氧化酶/过氧化物酶，用比色法测定。

根据ConA沉淀样品的上清液和与总淀粉样品中的GOPOD在510 nm处的吸光光度值之比判断直链淀粉在总淀粉中的含量。

该方法适用于所有的纯淀粉和谷物粉。

精确性

样品如为纯淀粉，相对标准偏差为<5%。

样品如为谷物面粉，相对标准偏差为～10%。

Amylose/Amylopectin Kits For the measurement of amylose/amylopectin ratio and content in cereal starches and flours. Based on a Con A precipitation procedure.

Content: 100 assays per kit

Appearance Four glass vials plus two plastic vials Specific Gravity Not applicable Solubility in Water Most components readily soluble. pH Value neutral Odour none Form Powders and liquid. Stability stable in a refrigerator for ten or more years Ingredients Name Proportion Concanavelin A 1 vial （glass） Amyloglucosidase/a-Amylase 1 vial （glass） Glucose Buffer 1 vial （polypropylene） Glucose Assay reagent 1 vial （glass） Glucose standard and Starch reference 1 vial each （glass and plastic）

直链淀粉/支链淀粉（胶淀粉）检测试剂盒组成成分:

瓶子1：冻干的Con A (伴刀豆球蛋白 A concanavalin A) ，200 mg，-20℃下稳定性>5年。（玻璃）

瓶子2：淀粉葡糖苷酶（淀粉葡萄糖苷酶/α-淀粉酶）【200U，条件为消化对硝基苯基β-麦芽糖苷(也就是3300U，条件为pH4.5，40℃下消化淀粉)】加上真菌α-淀粉酶(500U ，条件为pH5.0，40℃下消化 Ceralpha 试剂)，2mL，4℃下稳定性>5年。 （玻璃）

瓶子3：GOPOD 试剂缓冲液（葡萄糖缓冲液）。磷酸钾缓冲液(1M，pH7.4)，对羟苯甲酸(0.22M)和叠氮化钠(0.02% W/W)。4℃下稳定性> 3年。（聚丙烯）

瓶子4：GOPOD试剂酶（葡萄糖检测试剂 ）。葡糖氧化酶(>12,000U)加上过氧化物酶(>650U)和4-氨基安替比林(80mg)。冻干粉，-20℃下稳定性>5年。

瓶子5：D-葡萄糖标准溶液(5 mL,1.0mg/mL)溶于苯甲酸0.2%(w/v)。室温下稳定性>5年。（玻璃）

瓶子6：淀粉参考样品(含有特定含量的直链淀粉)，室温下稳定性>5年。（塑料）

试剂制备的准备：

1、用50mlCon A试剂将瓶子1中药品溶解，分成适当的几部分存放在聚丙烯管中，尽可能在-20℃下使用或冷藏。-20℃下稳定性>2年。

2、用20ml醋酸钠缓冲液将瓶子2中的药品溶解，分成适当的几部分存放在聚丙烯管中，

3、用蒸馏水将中的药品（GOPOD 试剂缓冲液）稀释至1L。现配现用。

(注意：如果瓶子3意外存放在-20℃下，一些盐可能会结晶。配制时要确保所有的结晶物质都溶解在1L的蒸馏水中）

4、用20ml GOPOD 试剂缓冲液溶解GOPOD试剂酶，并定量的转移到存放GOPOD 试剂缓冲液的瓶子中，用铝箔封住瓶子，避光保存。这种试剂黑暗中保存，2-5℃下能保存大约3个月，-20℃下稳定性大于12个月。

5、按提供的方法使用D-葡萄糖标准溶液和淀粉参考样品，室温下稳定性>5年。

安全考虑：

1、DMSO对皮肤有刺激性，用的时候要格外小心。它通过皮肤被吸收，对皮肤和眼睛都有刺激性。穿保护装、戴手套，避免溶剂溅出。尽可能在通风橱中进行试验。

2、ConA通过呼吸、皮肤接触或摄入体内，对人体是十分有害的。这种伤害不可逆转，可能会致畸。在使用ConA结晶体球蛋白和含有ConA的溶剂时要穿保护装、戴手套和特制的面具。

3、叠氮化钠是有毒的化学试剂，必须要有专门的处理。它要添加特殊的缓冲液来充当防腐剂。毒性通过缓冲可以被消除，但是缓冲液必须在4℃下保存。

缓冲液或溶剂：

1、乙酸钠缓冲液（10mM,pH 4.5）

加5.9ml1.05g/ml的冰醋酸到900ml的蒸馏水中用4g/100ml的NaOH溶液调pH到4.5（大约30ml）,加0.2g叠氮化钠，用蒸馏水定容至1L。室温下稳定性>2年。

2、ConA 浓缩液(600 mM, pH 6.4 乙酸钠缓冲液)

称取49.2g无水醋酸钠，175.5g氯化钠，0.5gCaCl2.2H2O ，0.7 gMgCl2.6H2O 和0.7 g MnCl2.4H2O ，用900 mL 蒸馏水将其溶解逐滴加入冰醋酸调pH为6.4，再用蒸馏水定容至1L。4℃下保存2周。（注意：配制这种复合缓冲液时，pH的调节特别重要，如果pH低于

6.4，就会有沉淀物形成，就算pH再调回来，沉淀物也不会溶解。结果会导致缓冲液必须丢弃重新配制。）

3、ConA 溶液（使用浓度）

将30ml ConA 浓缩液用蒸馏水稀释至100ml。现配现用。

4、DMSO

分析纯试剂。室温下可保存5年。

预处理：淀粉样品事先用乙醇进行预处理，除去脂质。如果样品没有用乙醇进行预处理，在某些样品中测得的直链淀粉含量会低50%。

实验步骤：

A、淀粉预处理

1、准确称取淀粉或面粉样品至10ml的样品管中。记录样品重量精确到0.1mg。

2、加1ml DMSO至试管，在漩涡混合器中慢速混匀，在沸水浴中加热直至分散（大约1分钟）确保淀粉没有结团结块。

3、密封试管，高速混匀。沸水浴加热15min，再高速间歇混匀。

4、室温放置大约5min，加2ml 95%乙醇，混匀，再加4ml乙醇，盖上盖子，颠倒混匀。形成淀粉沉淀物，将试管静止15min（条件允许过夜静止）。

5、2000r,5min离心，弃去上清液，倒置在纸巾上10min,确保乙醇全部挥发。在接下来直链淀粉和淀粉的测定中使用此沉淀物。

6、加2ml DMSO到淀粉沉淀物中，将试管沸水浴15min(间或混匀)，确保没有块状。

7、从沸水浴中取出试管，立即加入4ml ConA 溶液，将试管中药品转移至25ml容量瓶中。用 ConA 溶液定容。

（整个过程必须在2h内完成）

B、支链淀粉- ConA 沉淀物和直链淀粉的测定

1、量取1mlA试剂到2ml的试管中，加0.54ml的ConA 溶液，盖上盖子，反复颠倒，混匀。避免样品起泡。

2、室温静置1h。14000r，10min，室温下离心。

3、转移1ml的上清液到15ml的离心管中，，加3ml100mM醋酸钠缓冲液，pH4.5，混合药品。轻轻塞住管口，沸水浴5min，使ConA变性。

4、将试管在40℃下水浴，平衡5min，，加1ml淀粉转葡萄糖苷酶和a-淀粉酶的混合物，40摄氏度下反应30min，2000r离心5min。

5、准确量取1ml上清液，加4ml GOPOD试剂，40摄氏度下反应20min，使空白试剂和D-葡萄糖标准液同时反应。

6、在510nm下测定每一个样品和D-葡萄糖标准液的吸光光度值。

C、总淀粉的测定

1、将0.5mlA溶液和4ml100mM乙酸钠溶液混合，pH 4.5

2、加1ml淀粉转葡萄糖苷酶和a-淀粉酶的混合物，40摄氏度下反应10min，

3、准确量取1ml上清液，加4ml GOPOD试剂，40摄氏度下反应20min。这个反应必须让样品和标准液按B部分同时进行。

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