Takara是一家总部位于日本京都的生物医药企业,起源于1841年,正式创立于1925年。该公司主要从事研究试剂、科学仪器、保健食品以及基因和细胞治疗产品(CDMO)的研发和销售。
对于生命科学工作者来说,Takara应该不陌生,其提供的限制性内切酶和聚合酶是实验室中常用试剂。Takara也是世界上shou批提供生命科学科研用试剂以及商用PCR仪器和试剂的企业。
TaKaRa逆转录试剂盒是一种将RNA逆转录为cDNA的专用试剂。RNA的纯度可以影响cDNA的合成量,而制备RNA的关键就是要抑制细胞中的RNA裂解酶,并防止所用仪器和试剂中RNA裂解酶的污染。因此,在实验中必须采取以下措施:戴一次性干净手套;使用RNA操作专用实验台;在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的RNA分解酶的污染。制品中附加了标准曲线制作用稀释液EASY Dilution(for Real Time PCR)将Total RNA或cDNA稀释至低浓度时也能够进行准确稀释,容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。
提取的Total RNA中常常混有基因组DNA,而基因组DNA可以直接作为PCR模板进行扩增,造成解析结果不准确。为了避免这种情况发生,我们必须采取如下两种措施:1、引物设计时避免基因组DNA扩增;2、使用DNase I处理除去基因组DNA。
1、引物设计时避免基因组DNA扩增
我们可以利用基因组DNA具有外显子和内含子的结构,在引物设计上下工夫,使PCR反应时不能扩增基因组DNA。此时我们首先应确认目的基因的基因组结构,选择较长的内含子。然后,在这个内含子两侧的外显子上分别设计上、下游引物。Real Time PCR反应时通常扩增的目的DNA片段长度都比较短设置的条件也是适合短片段DNA的扩增,超过500bp就很难扩增了。所以,当内含子足够长时,基因组DNA来源的扩增就不能发生:当内含子较短时,基因组DNA来源的扩增可能发生,但基因组DNA来源的扩增产物比mRNA来源的扩增产物长,可通过分析融解曲线的方法加以区分。但是,此种方法不适合具有单个外显子的基因、或者不具有内含子的生物种以及基因组情报没被解析的生物种等,此时必须采取方法2解决。
2、使用DNase I处理除去基因组DNA
使用常规方法提取Total RNA后,再使用DNase I分解混入的基因组DNA,最后进行苯酚/氯仿抽提乙醇沉淀等纯化Total RNA。
金山科研平台现货供应TaKaRa逆转录试剂盒PrimeScript™ RT reagent Kit(RR037A),欢迎选购!
©
金山科研平台 Thermo Fisher官网Nunc、QSP、Nalgene、Invitrogen、Gibco耗材试剂授权一级代理是专业的授权总代理区域代理经销平台。
© 如需询价,请加客服QQ:1749072012 、客服微信:jinshanbio,或发送邮件到1749072012@qq.com
© 平台为生命科学研究相关领域提供一站式耗材试剂仪器解决方案和采购服务,数据资源基于CC协议。
© 本文地址:
https://thermonunc.cn/thread-72926.htm
特别声明:以上内容(如有图片亦包括在内)来源于授权厂家或网络,如有侵权,请联系客服删除,本平台不提供信息校正和存储服务。
Notice: The content above (including the pictures if any)comes from authorized manufacturers or networks. In case of infringement, please contact to delete it. This platform does not provide information storage services.