悬浮培养指的是一种在受到不断搅动或摇动的液体培养基里，培养单细胞及小细胞团的组织培养系统，那么悬浮细胞培养的操作步骤与注意事项有哪些呢？让我们一起来看看吧！
一、步骤
1. 将准备好的冻存细胞放入37℃水浴中解冻。
2. 用70%乙醇对顶端进行消毒，用吸管将细胞转移到含有5mlwan全MEM-10培养基的25cm2组织培养瓶中，轻轻摇动培养瓶，使细胞均匀分布于培养瓶中，放入5%CO2加湿培养箱中37℃培养过夜。
3. 将培养基吸出，用0.5ml37℃的胰酶/EDTA覆盖细胞，消化30~40s。
4. 加入10ml旋转瓶wan全培养基-5，并将细胞转移至50ml的离心管中。室温1800g离心5min，弃上清。
5. 将细胞沉淀悬浮在5ml的旋转瓶wan全培养基-5中，上下吹打，将细胞团打散。
6. 在100ml或200ml通气旋转瓶中加入50ml旋转瓶wan全培养基-5，并将细胞悬液转移到瓶中。
7. 取出1ml细胞悬液，用血细胞计数器进行细胞计数。加入适量的旋转瓶wan全培养基-5，使细胞密度为（3~4）×105细胞/ml。将细胞放入无CO2培养箱，37℃旋转培养。
8. 随后的两天让细胞继续生长，并且每天对细胞进行计数，加入适量的旋转瓶wan全培养基-5以维持（3~4）×105细胞/ml的细胞密度。
9. 取1ml的细胞悬液，用血细胞计数器对细胞进行监测。
10. 当细胞密度达到（4~5）×105细胞/ml时，隔天或每天用培养基将细胞稀释至1.5×105或2.5×105细胞/ml。
11. 分别将装有50ml或100ml细胞悬液的100ml或200ml通气旋转瓶放入37℃无CO2培养箱旋转培养。每天或隔天传代。
二、注意事项
由于有些细胞是不能被养活的，所以需要高的初始密度。
更多有关悬浮细胞培养的操作步骤与注意事项，请联系金山科研平台：微信jinshanbio
©
金山科研平台 Thermo Fisher官网Nunc、QSP、Nalgene、Invitrogen、Gibco耗材试剂授权一级代理是专业的授权总代理区域代理经销平台。
© 如需询价，请加客服QQ：1749072012 、客服微信：jinshanbio，或发送邮件到1749072012@qq.com
© 平台为生命科学研究相关领域提供一站式耗材试剂仪器解决方案和采购服务，数据资源基于CC协议。
© 本文地址：
https://thermonunc.cn/thread-72949.htm
特别声明：以上内容(如有图片亦包括在内)来源于授权厂家或网络，如有侵权，请联系客服删除，本平台不提供信息校正和存储服务。
Notice: The content above (including the pictures if any)comes from authorized manufacturers or networks. In case of infringement, please contact to delete it. This platform does not provide information storage services.
QQ:1749072012