RNA提取的原理是什么?


不同组织RNA提取原理是将细胞裂解,释放出 RNA,并通过不同方式去除蛋白,DNA 等杂质,最终获得高纯度 RNA 产物的过程。常用的RNA提取方法是Trizol方法,Trizol内含异硫氰酸胍能迅速破碎细胞,同时使核蛋白复合体中的蛋白变性并释放出核酸,由于释放出的DNA和RNA在特定pH值下的溶解度不同,且分别位于中间相和水相,从而使DNA和RNA得到分离,取出水相后,通过有机溶剂 (氯仿) 抽提及异丙醇沉淀,可得到纯净RNA。那么你知道RNA提取的原理是什么吗?让我们一起来看看吧!

一、常见RNA提取样本细胞裂解方法

1.异硫氰酸胍/苯酚(Trizol)

原理:苯酚裂解细胞,变性蛋白,但不能wan全抑制RNase活性。异硫氰酸胍迅速溶解蛋白,破碎细胞,解离核蛋白复合体,释放核酸,并抑制RNase活性,保持RNA完整性。苯酚是酸性酚,后续加入氯仿进行有机萃取。

特点:得率高、可提取到含miRNA和其他小RNA在内的总RNA。但产生有机试剂废物。

适用范围:次级代谢较少的植物组织,如幼苗、幼叶等。培养细胞、动物组织、微生物。

2.胍盐/β-巯基乙醇法:

原理:胍盐一般是盐酸胍或异硫氰酸胍。盐酸胍迅速裂解细胞,变性蛋白,并抑制核酸酶活性。配合β-巯基乙醇还原蛋白质结构中的二硫键,从而使RNase变性。

特点:得率高

适用范围:次级代谢较少的植物组织,如幼苗、幼叶等。培养细胞、动物组织、微生物。

二、常见抽提方法:

1.酚氯仿抽提(有机试剂抽提)

原理:将被裂解的生物样本,混匀离心分相以后,RNA在上层水相,DNA,蛋白质在中间层,下层有机相。收集水相加入乙醇或异丙醇可沉淀RNA,漂洗后得到RNA。

优点:得率高、可提取到含miRNA和其他小RNA在内的总RNA。

缺点:用到苯酚、氯仿等有毒试剂。

2.硅胶柱法抽提

原理:硅基质材料在一定的高盐缓冲系统下高效、专一地吸附核酸。(高盐低pH吸附核酸,低盐高pH释放核酸。

优点:操作简单、安全无毒

缺点:需配合高速离心机使用;提取的总RNA不含小于200nt的小RNA。

3. 磁珠法抽提

原理:纳米微球磁珠材料表面涂上一层二氧化硅,使磁珠获得吸附能力。

优点:磁场中快速分离,无需离心,可实现自动化操作。

缺点:成本较高;提取的RNA可能残存磁珠。

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