荧光素是一种常见的生物发光报告子，用于体外成萤光素酶。这种萤火虫萤光素酶的水溶性底物（通常来自Photinuspyralis）

利用ATP和Mg2+作为共因子在氧气的存在。通过ATP的利用，反应可以进一步用于指示能量或生命的存在是为了起到生死攸关

的污点的作用。

萤火虫萤光素酶是研究基因最chang用的报告基因之一表达由于其ji端的敏感性，以及快速，易于使用的系统。萤光素酶用于监测

细菌、培养细胞以及转基因植物或动物。它是一种约61kDa的蛋白质，作为单体具有活性，不需要加工其活动。萤火虫萤光素

酶通过催化荧光素的氧化羧化作用产生具有任何已知生物发光中最gao效率之一的反应。萤光素活性可以通过与启动子/增强子的

相关性来表征基因调控元素。优化后化学发光反应和调节元件的转录活性。

本手册旨在介绍一种简单、经济、可靠的方法，用于在体外报告系统中检测荧光素酶活性。

生物发光反应：

几个因素可能会影响反应的灵敏度，包括温度、pH或底物浓度我们建议使用pH为7.8的缓冲液，并在使用前将所有试剂预热至

室温，以获得最佳结果。GoldBio还建议添加在测定缓冲液中过量的ATP和Mg2+用于更好的反应。

当荧光素被添加到萤光素酶样品中时，会立即产生闪光在0.3-0.5秒内达到峰值强度。然后，光线开始迅速衰减一半寿命约为0.5

-1.0分钟。但当辅酶A最初加入测定缓冲液时能够防止快速反应衰变延长了反应2-5分钟。如果稍后添加到反应中混合物，辅酶A也促进额外的二次闪光。

Gold Bio推荐基于Yuichi Oba等人（2003）：

-100mM Tris-HCl（pH 7.8）

-5mM MgCl2

-250μM CoA

-150μM ATP（Fraga，2008）

-150μg/mL d-荧光素（GoldBio）

一些研究人员还添加了二硫苏糖醇（DTT）或EDTA等成分（Steghans，1998）。您可以调整您的特定分析缓冲液以达到最佳

效果满足您的需求。我们建议对您的特定细胞进行动力学曲线的初步测试以获得最佳效果。

GoldBio D-荧光素钾盐体内使用手册提供者——金山科研平台：微信jinshanbio

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