天根细菌基因组dna提取试剂盒简介：

本试剂盒采用可以高效、专一结合 DNA 的离心吸附柱和dute的缓冲液系统，既适用于革兰氏阴性菌基因组 DNA 的提取，也可适用于革兰氏阳性菌基因组 DNA 的提取。本试剂盒也可用于食品致病菌(微生物)基因组提取，如：金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、出血性大肠杆菌 O157：H7、单增李斯特、沙门氏菌、阪崎肠肝菌等。可从1-5 ml细菌培养液中，快速提取纯化10-40μg纯净的基因组 DNA，所得基因组 DNA 可直接用作 PCR 模板、酶切、杂交等分子生物学实验。

天根细菌基因组dna提取试剂盒特点：

★简单快速：革兰氏阴性菌在1h内可获得高纯的基因组DNA。

★纯度高：获得的DNA纯度高，可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。

天根细菌基因组dna提取试剂盒下游应用：

★革兰氏阴性菌基因组提取

★革兰氏阳性菌基因组提取

★食品中致病菌基因组提取

天根细菌基因组dna提取试剂盒操作步骤：

1.取细菌培养液1-5 ml,10,000 rpm(~11,500×g)离心1min,尽量吸净上清。

2.向菌体沉淀中加入200μl缓冲液GA,振荡至菌体chedi悬浮。

注意：对于较难破壁的革兰氏阳性菌，可略过第2步骤，加入溶菌酶溶液进行破壁处理，具体方法为：加入110μl缓冲液(20 mM Tris,pH 8.0; 2 mM Na₂-EDTA;1.2%Triton),和70μl溶菌酶溶液(50 mg/ml,货号：RT401),37 ℃处理30min以上。如果需要去除RNA,可加入4μl RNase A(100 mg/ml)溶液(货号：RT405-12),振荡15 sec,室温放置5 min。

3.向管中加入20μl Proteinase K溶液，混匀。

4.加入220μl缓冲液GB,振荡15 sec,70 ℃放置10 min,溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不chedi，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。

5.加220μl无水乙醇，充分振荡混匀15 sec,此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

6.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12,000 rpm(~13,400×g)离心30 sec,倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

7.向吸附柱CB3中加入500μl缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 pm(~13,400×g)离心30 sec,倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

8.向吸附柱CB3中加入600μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g)离心30 sec,倒掉废液，吸附柱CB3放入收集管中。

9.重复操作步骤8。

10.将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以chedi晾干吸附材料中残余的漂洗液。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。

11.将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μl洗脱缓冲液TE,室温放置2-5 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,将溶液收集到离心管中。

注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH₂O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2 min,12,000rpm(~13,400×g )离心2 min。

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