NEB T4 DNA连接酶(Ligase)将连接以下底物：

NEB T4 DNA连接酶(Ligase)的特性和用法：

浓度：400000个内聚端基单位/ml和2000000个内聚端基单位/ml

反应条件：1X T4 DNA连接酶反应缓冲液；在16°C条件下培养。

1X T4 DNA连接酶反应缓冲液：50 mM Tris-HCl、10 mM MgCl2、1 mM ATP、10 mM DTT(pH 7.5 @ 25°C)。

贮存溶液：10 mM Tris-HCl、50 mM KCl、1 mM DTT、0.1 mM EDTA、50% Glycerol（pH 7.4 @ 25°C）。

热失活：65℃10min。

NEB T4 DNA连接酶(Ligase)的应用特性：

★限制性片段的克隆

★将连接体和适配器连接到钝端DNA

NEB T4 DNA连接酶(Ligase)使用时的注意事项：

（1）ATP 是反应中必不ke少的辅因子。这与需要 NAD 作为辅因子的E. coliDNA 连接酶不同。

（2）若需稀释 T4 DNA 连接酶，推荐使用含 50% 甘油的贮存缓冲液（稀释缓冲液 A，NEB #B8001S）稀释，然后于 -20℃ 贮存。如稀释后立即使用，也可以使用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。

（3）连接反应可以在添加 1 mM ATP 的四种限制性内切酶缓冲液的任何一种或在 T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK）缓冲液中进行。

（4）为方便起见，连接可在室温（20 - 25℃）条件下进行。连接粘性末端，在 20 µl 反应体系中加入 1 µl T4 DNA 连接酶，反应 10 分钟。连接平末端，在 20 µl 的反应体系中加入 1µl 的 T4 DNA 连接酶，反应 2 小时；或者加入 1 µl 高浓度的 T4 DNA 连接酶反应 10 分钟。此外，也可选择 NEB Quick Ligation 快速连接试剂盒（#M2200S）[30 次反应] 或（#M2200L）[150 次反应]），在室温条件下反应 5 分钟，即可完成 DNA 平末端和粘性末端的连接。

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