细胞凋亡简介
细胞凋亡分为病理性凋亡和生理性凋亡两种,生理性凋亡由遗传控制,受既定程序(或基因)调控,属于程序性的细胞死亡;病理性凋亡是非遗传控制的细胞的意外坏死,区别于细胞坏死。
流式细胞检测原理 细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上发生特征性改变。由于凋亡细胞核的改变,荧光染料对凋亡细胞的DNA可染性发生改变,主要是DNA可染性的降低。凋亡细胞形态的改变影响光的散射性,在流式细胞仪中,散射光有两种:前散射光和侧散射光,前散射光与细胞的大小有关,侧散射光与细胞内颗粒多少有关,反应的是细胞内光的散射情况。 Annexin-V是一种分子量在35~#6kDa的钙离子依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine PS)高亲和力特异性结合,以标记的FITC的Annexin-V作为探针,利用流式细胞仪检测细胞凋亡。PI是一种核苷酸,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡的中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过而使细胞核染成红色,将Annexin-V与PI匹配使用,可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开。实验室检测流程
1、收集细胞2、洗涤细胞3、预冷的70%乙醛固定细胞4、PBS细胞重悬5、细胞过滤6、PI染色,4℃避光30min结果判断
PI用氩离子激发荧光,激发光波长为488 nm,发射光波长大于630 nm,产生红色荧光分析PI荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。
检测示例
客户提供
1、实验信息,包括细胞类型,细胞处理药物和条件。2、实验结果要求等。
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