产品英文名称：Allophycocyanin Labeling Kit-NH2

产品中文名称：别藻蓝蛋白标记试剂盒- NH2

Allophycocyanin Labeling Kit-NH2 产品特性

整个标记过程仅需1个小时

整个标记过程在1支过滤管中进行

荧光标记抗体回收率高

适用于50-200 μg的IgG

Allophycocyanin Labeling Kit-NH2 产品描述

藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白，它的荧光强度要比化学荧光探针，如荧光素和罗丹明高得多。因此，用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。别藻蓝蛋白（APC）是一种藻胆蛋白，它在660 nm附近有蓝色荧光。Allophycocyanin Labeling Kit-NH2能够简便快速地制备被APC标记的IgG，NH2-reactive APC（该试剂盒的成分之一）具有一个活性的酯基团，不需任何活化就能够轻易地与靶分子中的氨基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube用来交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了标记产物的Storage buffer等用于APC标记的所需的全部试剂。

*APC: Allophycocyanin (别藻蓝蛋白)

Allophycocyanin Labeling Kit-NH2 试剂盒内容

NH2-reactive APC…………… 3管

Reaction buffer……………… 200 μl × 1管

WS buffer…………4 ml × 1瓶

Filtration tube………3管

标记IgG操作步骤

（1）将100 μl WS buffer以及含有100 μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）

（2）8,000-10,000 g离心10分钟后，加入100 μl WS buffer再离心一次。b）

（3）离心完成后，将10 μl Reaction buffer加入到NH2-reactive APC中并用移液器吹打使其溶解。

（4）将含有NH2-reactive APC的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吸取溶液吹洗净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。

（6）将190 μl WS buffer加入到过滤管中并用枪吹打10到15次来回收标记产物。c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）

a）样品溶液的体积不应超过100 μl。如果抗体浓度低于0.5 mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100 μg。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记后产物的浓度为1.4-1.8 mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-2个APC分子。没有被结 合的APC可能会干扰正常的免疫试验。如果需要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。

d）通常，APC标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

Allophycocyanin Labeling Kit-NH2 注意事项

用该试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。

在标记过程中，IgG或者Allophycocyanin-IgG标记物始终在Filtration tube的滤膜上。

如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits（不包含于本试剂盒中）来纯化。

如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。