货品编号： TAKARA.RR047A 品牌： TAKARA 品名： 逆转录试剂盒 规格： 20 μl反应 × 100 次 储存条件： -20℃

制品内容 (Code No.: RR047A: 20 μl反应×100次量)

■制品说明 为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但TotalRNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，

因此会造成解析结果不准确。为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。但是，此方法不适合具有单个

外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析

的生物种等也同样不适合于本方法。在这种情况下，我们常常需要对TotalRNA样品进行DNaseI处理，以除去残存的基因组DNA。而DNaseI处理通常要进行复杂

的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。 PrimeScriptRTreagentKitwithgDNAEraser是可以除去基因组DNA进行RealTimeRT-PCR反应的专用反转录试剂。Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA

Eraser，通过42℃，2min即可除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNAEraser处理后的样品可以直接进行15min的

反转录反应合成cDNA，因此，20min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。 使用本制品合成的cDNA适用于嵌合法和探针法qPCR分析，可以根据实验目的，选择与TBGreenPremixExTaqII(TliRNaseHPlus)(CodeNo.RR820Q/A/B)*、 TBGreenPremixExTaq(TliRNaseHPlus)(CodeNo.RR420A/B)*、ProbeqPCRMix(CodeNo.RR391S/A/B)组合使用。 *：Takara嵌合法RealTimePCR（qPCR）产品的名称从2017年12月下旬开始，将逐步变更为「TBGreen系列」。产品Code、性能和原有产品相比没有变化，请

继续放心使用。 产品名称将随新lot的产品逐步变更，产品网页或操作说明书可能会先于产品标签变更，望知悉！

■试剂盒特长 1.含有去除基因组DNA的gDNAEraser，只需2min即可除去基因组DNA。 2.只需15min即可高效合成RealTimePCR反应用模板cDNA，是进行2StepRealTimeRT-PCR反应的理想试剂。 3.反转录引物使用了Random6mers和OligodTPrimer混合的RTPrimerMix，可以均匀合成样品中的各种cDNA。 4.本制品提供了TBGreenqPCR分析法和探针qPCR分析法各自适合的反应体系，可以根据分析方法选择体系。

TBGreenqPCR分析法和探针qPCR分析法区别如下： (1)反转录反应中RTPrimerMix的用量。 (2)反转录反应中总RNA的用量。 5.RealTimeRTPCR定量需要建立标准曲线，建立标准曲线的条件就是需要将总RNA和反转录cDNA稀释到较低的浓度。如果用水或TEBuffer稀释时，由于模板浓

度低不稳定，因而会缩小曲线范围，结果精度降低。本制品中附加了标准曲线制作用稀释液EASYDilution(forRealTimePCR)，将TotalRNA或cDNA稀释至低浓度

时也能够进行准确稀释，容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。

■注意事项 1．使用本制品合成的cDNA与TBGreen关联制品组合使用时，建议使用： TBGreenPremixExTaqII(TliRNaseHPlus)(CodeNo.RR820Q/A/B) TBGreenPremixExTaq(TliRNaseHPlus)(CodeNo.RR420Q/A/B) 以上制品与本制品组合使用，可以得到可信度高的结果。 本制品与TBGreenFastqPCRMix(CodeNo.RR430S/A/B)组合使用时，有时反应性能不好，不推荐使用。 2.当同时需要进行数次反应时，应先配制各种试剂的混合液(MasterMix；其中包括RNaseFreedH2O、Buffer、酶等)，然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的

试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。 3.gDNAEraser和PrimeScriptRTEnzymeMixI在使用前要小心地离心收集到反应管底部。由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。同时，要

使用精确、量程适合的移液枪，并且不要使Tip插入液面过深，否则会因Tip壁粘着造成损失，而使酶量不足。 4.5×gDNAEraserBuffer和5×PrimeScriptBuffer2（forRealTime）在使用前需Vortex振荡混匀，轻轻离心后使用。 5.分装试剂时务必使用新的枪头(Tip)，以防止样品间污染。