酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，简写ELISA或ELASA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。那么你知道ELISA的常见问题有哪些？解决方法是什么吗？让我们一起来看看吧！

一、高背景或阴性对照只偏高

原因：

1. 阴性对照孔被阳性对照货样品污染

2. 抗体非特异性结合

3. 酶结合物过浓

4. 孵育温度过高

解决方法：

1. 洗涤是，勿将洗液溢出孔外

2. 封闭液不合适，更换封闭液

3. 请检查酶结合物是否按说明书规定稀释

4. 检查孵育箱的温度是否正确、稳定

二、标准曲标准曲线良好，但样本无检测信号

原因：

1. 样本中无检测物或检测无含量极低

2. 样本中其它物质影响/掩盖检测

3. 样本中检测物浓度过高，HOOK效应导致假低值

解决方法：

1. 设置内参，重新实验

2. 作适当稀释，降低其它物质的干扰，或作系列稀释，检测回收率

3. 适当倍数稀释样本，检测物浓度尽量在试剂盒检测范围内

三、重复性较差

原因：

1. 微孔中有气泡

2. 试剂未混匀

3. 样本中有杂质或沉淀物

4. 微孔包被面被吸头划破

解决方法：

1. 用针尖挑破气泡

2. 确保充分混匀试剂

3. 使用前；离心

4. 加液是小心操作

四、假阳性反应

原因：

1. 洗涤不充分

2. 洗板机管道堵塞

3. 加结合物是，洒在微孔边缘

解决方法：

1. 使用前需检查洗板机是否正常工作

2. 需经常维护洗板机

3. 小心向微孔加入结合物，加入微孔底部中央，避免与孔壁和边缘接触

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