目前常用紫外分光光度法检测核酸的浓度及纯度。

一、检测原理

紫外分光光度法基于DNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，DNA/RNA在260nm处有最大的吸收峰，蛋白质在280nm处有最大的吸收峰，盐和小分子则集中在230nm处。因此，可以用260nm波长进行分光测定核酸浓度，OD值为1相当于大约50ug/ml双链DNA，单链DNA浓度约为33ug/ml，RNA约为40ug/ml，寡核苷酸约为35ug/ml。如用H，O稀释DNA/RNA样品n倍并以H，O为空白对照，根据此时读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度

二、DNA纯度比值

DNA 纯度比值是表示DNA样本中 DNA 的相对浓度的指标，它是通过测量样本中不同物质的含量来计算的。A280nm是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长，纯DNA的A260/A280比值为1.8，纯RNA为2.0。假如比值低，表示受到蛋白（芳香族)或分类物质的污染，需要纯化样品。比值=1.5相当于50%蛋白质/DNA溶液。A230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，纯DNA和RNA的A260/A230比值为2.5。若比值小于2.0标明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。

三、DNA纯度比值可能受到以下因素的影响

1.样本收集和存储方法：样本在收集和存储过程中可能会受到污染，影响DNA纯度。

2.DNA 提取方法：不同的DNA提取方法可能导致DNA纯度的不同。

3.生物样本的特性：不同的生物样本中的DNA含量和组成也可能导致DNA纯度的不同。

4.纯化步骤：在纯化DNA时，不同的纯化方法和操作步骤可能对DNA纯度产生影响。

5.测量方法：不同的测量方法可能产生不同的DNA纯度比值。

因此，为了确保DNA纯度的准确性，需要在每个步骤中注意控制可能影响DNA纯度的因素，并使用适当的方法和技术进行测量。

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