你知道RNA提取的实验步骤是什么吗?


RNA是目前发现细胞内生物功能zui丰富多样的生物大分子,同时是DNA与蛋白质信息传递的桥梁,因此完整RNA的提取和纯化是功能基因组时代的重要手段,那么你知道RNA提取的实验步骤是什么吗?让我们一起来看看吧!

以Trizol法提取组织细胞为例:

1.提取细胞RNA时,先离心沉淀细胞,每5~106个细胞加1ml Trizol后,反复用枪吹打或剧烈震荡以裂解细胞;

2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30℃下放置5分钟;

3.在上述EP管中,按照每1ml Trizol后加0.2ml氯仿的量加入氯仿,盖上EP管盖子,在手中用力震荡15秒,在室温下(15~30℃)放置2~3分钟后,12000g(2~8℃)离心15分钟;

4.去上层水相置于新EP管中,按照每1ml Trizol加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇,在室温下(15~30℃)放置10分钟后,12000g(2~8℃)离心10分钟;

5.弃上清,按照每1ml Trizol加1ml 75% 乙醇进行洗涤,涡旋混合,7500g(2~8℃)离心5分钟,弃上清;

6.让沉淀的RNA在室温在自然干燥;

7.用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。

8.RNA检测

(1) RNA的电泳图谱,电泳的目的是在于检测28S、18S、5S条带的完整性和他们的比值,一般的,如果28S和18S条带明亮、清晰、条带锐利,并且28S的亮度在18S条带的两倍以上,我们认为RNA的质量是好的。

(2) 测定样品在260nm和280nm的吸光值按1OD=40μg/ml RNA计算RNA的产量,一般的OD260/OD280在1.8-2.0范围,我们认为RNA的质量是好的,如果R<1.8,说明溶液中蛋白或者时其他有机物的污染比较明显,如果R>2.2,说明RNA已经水解成单核酸了。

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