什么是血清

血清，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原及某些凝血因子后分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆。

血清在细胞培养中的作用

血清的成分多样，可以给细胞提供：

1. 基本营养物质，如氨基酸、维生素、脂类物质、无机物、核酸衍生物等细胞生长必需的物质；

2. 激素：胰岛素、促生长激素、类固醇激素如睾酮和孕酮、肾上腺皮质激素如地塞米松等。

3. 生长因子：表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、血小板生长因子、神经细胞生长因子等；

4. 结合蛋白：结合蛋白在细胞代谢过程中起着重要作用，它能携带重要地低分子量物质，如转铁蛋白结合铁离子，白蛋白携带维生素、激素等；

5. 促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤；

6. 蛋白酶抑制剂：中和某些细胞(如内皮细胞等)释放的蛋白酶，从而对培养中的细胞起到某些保护作用；

7.血清含有的一些微量元素和离子在代谢解毒中起重要作用，如SeO₃，硒等；

8.血清蛋白使血清具有一定的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，如悬浮培养搅拌时保护细胞。

常用的血清

目前常用的血清有胎牛血清、新生牛血清和小牛血清。

以上三种血清中胎牛血清的品质ZUI高，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少，因此价格也最高。

血清的使用与选择

血清的使用浓度一般在5%~20%，常用是10%。

有些细胞需要胎牛血清才能生长，而有些细胞有小牛血清就能生长。因此，要根据具体用途与需要选择合适的血清。

血清的储存与解冻

1.储存：建议将血清储存在-5℃~-20℃（HyClone胎牛血清建议储存在-10℃）。注意：建议不要将血清储存在-80℃中！（因为储存在-80℃，解冻时巨大的温差会使血清产生更多的沉淀。）

2.解冻：不建议于4℃过夜解冻，也不建议直接将冷冻的血清放在37℃水浴或者温箱中解冻，因为若血清没有混匀，底部的蛋白会变性形成沉淀。

血清解冻的方法（三步法）如下：

注：在水浴过程中，血清要*浸入水中，同时在融化过程中要慢慢摇动瓶身混匀血清，但在摇动中尽量不要产生泡沫。

血清在解冻后，可以根据实验需求分装成单次用量，密封好后立即放回-20℃冰箱继续储存以供进一步使用，这样可以有效避免反复冻融的问题。

血清出现沉淀或絮状物质的原因

1. 2-8℃长时间储存。

2. 解冻过程中未混匀。

3. γ-辐照：不会损害血清的理化特性或细胞培养性能。

4. 反复冻融：使血清脂蛋白发生变性造成浑浊。

5. 血清中残留的纤维蛋白原：残留的纤维蛋白原在解冻后会转化为纤维蛋白，过量的纤维蛋白在血清中表现为可见的絮状物质。

去除方法：400 g离心。不建议直接过滤血清以去除絮状物质，因为过滤器可能会堵塞或者截留重要的蛋白质。

6. 磷酸钙：磷酸钙在血清中通常呈云状，并且在倒置显微镜下观察会看到可以自由移动的小黑点，因此磷酸钙沉淀通常被误认为是微生物污染物。

检测是否污染方法：将1 mL待测血清直接倒在细菌琼脂平板上，在37℃培养之后观察菌落的生长情况。在油镜（放大1000倍）下观察革兰氏染色，以确定是否受到污染。不建议用37℃孵育的血清直接检测无菌性，因为在37℃孵育之后，血清中的磷酸钙沉淀物会增加。

国内购买胎牛血清的现状

难辨真假，产地不实，有的甚至都不是牛血清。非正规胎牛血清产品会直接影响实验的结果和稳定以及数据的真实性，对实验造成很大的影响。因此，购买血清产品时一定要选择可靠的产品！

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