一提到ELISA，各位做科研的小伙伴都很熟悉，不就是简单的抗原抗体反应嘛？但这“简单的免疫反应"，往往在实际操作中一个不小心，结果就会相差甚远，甚至功亏一篑，假阳性或者假阴性会让人焦头烂额，那么，到底要怎样快速有效的得到可靠的ELISA结果呢？

今天小编给大家带来的是一家位于德国的专业生产免疫优化试剂的公司­——candor bioscience，它专注于ELISA各个环节中的试剂，为广大研究者提供超过50种不同类型的产品，包括优化试剂，封闭试剂，稳定剂和免疫实验缓冲液。通过使用这些试剂，可以帮助您提高实验结果的可靠性，简化实验步骤，减少实验时间。

接下来，小编将通过Sandwich-ELISA的实验过程像大家展示candor bioscience优质ELISA产品在实验中的应用。

第一步，抗体的包被：

用Coating Buffer 1x（货号120/121）将抗体稀释至0.1 - 10 µg/mL。在酶标板反应孔中加100-150 µL包被好的抗体，4℃孵育过夜或室温孵育1-4 h。次日，弃去孔内溶液，用Washing Buffer 1x （Washing Buffer 10x TRIS, 货号145）洗板3 -5次，每次3 min。

第二步，封闭与稳定：

用表面封闭剂来充填空隙，从而排除ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。推荐使用的表面封闭剂如The Blocking Solution（货号110），SmartBlock™（货号113），BSA-Block（货号115）。每个空中加入200 µl的表面封闭剂，室温孵育1-2 h后，弃去孔内溶液，用Washing Buffer 1x （Washing Buffer 10x TRIS, 货号145）洗板3 -5次，每次3 min。

如果想保持ELISA板包被状态的长期稳定，这个步骤就是必选的。可以选用Liquid Plate Sealer®（货号160）进行ELISA板的稳定，向每个孔中加入200 µl的Liquid Plate Sealer®，室温孵育15-90 min，弃去孔内溶液，在37-45 ℃条件下干燥1-2 h，这样处理后的板子放在密封袋中，在干燥、2-8 ℃的环境中保存1-3 年的时间。

第三步，添加样品或校准液(双重测量)：

在孔中加入100-150 µL用样品稀释液稀释后的样品以及标准液，室温孵育30 min，弃去孔内溶液，用Washing Buffer 1x （Washing Buffer 10x TRIS, 货号145）洗板3 -5次，每次3 min。

推荐使用candor bioscience优质buffer：

1. LowCross-Buffer®（货号100），有助于减少交叉反应、基质效应和非特异性结合等干扰。将干扰降到zui低，提升了分析的质量与结果的可靠性。

2. Sample Buffer（货号105），适合在无干扰的情况下使用。

3. Antibody Stabilizer（货号130/131），可以在2-8°C下长期储存蛋白质或抗体的稳定剂

第四步，加入标记抗体并检测：

向每个孔中加入100-150 µl的标记抗体(HRP，辣根过氧化物酶;AP、碱性磷酸酶等)，室温孵育2-4 h，弃去孔内溶液，用Washing Buffer 1x （Washing Buffer 10x TRIS, 货号145）洗板3 -5次，每次3 min，进行底物检测(如过氧化物酶的TMB)。

推荐使用candor bioscience优质buffer：

1.HRP-Protector™（货号222）, 用于在2-8℃长期保存HRP-结合物。

2. AP-Protector®（货号235），用于2-8℃长期保存AP-结合物，还可直接用于AP偶联物的培养。

3. LowCross® HRP-Stab（货号270），用于在2-8℃长期保存HRP结合物，可以最大限度地减少非特异性结合、交叉反应和基质效应，中和干扰（包括 HAMA 的衍生干扰）。

4. LowCross-Buffer®（货号100），有助于减少交叉反应、基质效应和非特异性结合等干扰。将干扰降到zui低，提升了分析的质量与结果的可靠性。

5. Sample Buffer（货号105），适合在无干扰的情况下使用。

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