数字PCR的优势


数字PCR的优势


得益于日益完善的“有限稀释”技术,使得数字PCR在分析模板含量及组成方面有着无可比拟的灵敏度。相对于上一代qPCR,dPCR的优势体现在以下几个方面:


高检测灵敏度

传统的常规PCR以及荧光定量qPCR,分别通过电泳条带染色以及扩增循环过程中荧光的增加来检测模板DNA的含量,这两种检测方法决定了低拷贝数的模板难以检测到。而数字PCR将一个传统的PCR反应分割成了数万个体系,这些体系独立扩增,独立检测,保证了个位数的模板数量都可以被检测到。


高定量精确度

使用qPCR进行绝对定量,需要制备反应标准品,绘制标准曲线,根据待检样品和标准曲线的关系进行换算,在反应和换算过程中势必会引入极大误差。而dPCR抛弃了标准品,通过微体系的荧光计数,直接将反应初始模板数量统计出来,即使某些微滴中的模板数量不止一个,也可以通过引入泊松分布提升其计算精确度。

高耐受性

当反应体系中有PCR抑制物存在时,常规的PCR体系经常会受到影响。而dPCR第一步反应体系的分配过程中,会导致模板和抑制物分配到不同的体系,从而显著降低了抑制物的干扰。并且,与qPCR不同的是,dPCR检测的是终点荧光,即使微体系稍微受到了影响,也不会影响最终结果的判读。


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